瞬時(shí)粘性末端連接酶預(yù)混液

  

■  瞬時(shí)連接粘性末端
■  dsDNA 切刻修復(fù)
■  構(gòu)建高豐度克隆文庫(kù)

瞬時(shí)粘性末端連接酶預(yù)混液是一種即用型 2X 預(yù)混液，內(nèi)含 T4 DNA 連接酶、專(zhuān)屬連接增強(qiáng)劑和經(jīng)過(guò)優(yōu)化的緩沖液。該預(yù)混液是專(zhuān)門(mén)為瞬時(shí)連接粘性末端底物（2-4 bp）和提高轉(zhuǎn)化效率而設(shè)計(jì)，它還簡(jiǎn)化了建立反應(yīng)所需的步驟，優(yōu)化了酶和緩沖液的比例。因?yàn)樵擃A(yù)混液在 -20℃ 儲(chǔ)存時(shí)為液體狀態(tài)，所以使用時(shí)無(wú)需解凍，特別是無(wú)需溫育時(shí)間就能高效連接粘性末端底物，反應(yīng)時(shí)僅需加入預(yù)混液及互補(bǔ)末端 DNA，混勻后轉(zhuǎn)化，從而節(jié)省了克隆連接反應(yīng)的時(shí)間。此外，亞克隆連接可以以低濃度在很小的體系里完成，節(jié)省用戶(hù)寶貴的 DNA 樣品，并且無(wú)需稀釋可直接轉(zhuǎn)化到多種化學(xué)感受態(tài)大腸桿菌中。

純化自重組 E. coli 菌株，含有編碼 T4 DNA 連接酶的基因。

在 10 μl 反應(yīng)體系中加入 1X 瞬時(shí)粘性末端連接酶預(yù)混液和 DNA 底物。10 μl 反應(yīng)體系中包含 1,800 個(gè) T4 DNA 連接酶粘性末端單位。

該試劑經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制檢測(cè)，以確保酶的高純度和高效率。

該預(yù)混液在 -20℃ 儲(chǔ)存時(shí)為液體狀態(tài)。-70℃ 保存時(shí)，反復(fù)凍融 20 次后，檢測(cè)該試劑無(wú)明顯變化。